TÉCNICAS EN PATOLOGÍA
AUXILIAR: LEIDY SUSY CASTELLON SANCHEZ
LABORATORIO CLÍNICO – U.M.S.A
12- TINCION O COLORACION
UNIVERSAL
La tinción del corte permite estudiar y conocer las
características físicas y químicas de los tejidos y las
relaciones entre las células que la constituyen. La
diferencia de tinción puede explicarse, por las
variaciones de estructuras de la composición
celular y de los tejidos y tinción más ordinaria y de
rutina utilizada en histopatología es la
hematoxilina y eosina.
Los colorantes son los elementos principales de las tinciones generales.
La molécula de un colorante tiene normalmente dos componentes importantes: uno
que aporta el color, denominado cromógeno, y otro que posibilita la unión a
elementos del tejido denominado auxocromo
El auxocromo puede ser un grupo inonizable, un grupo que reacciona
covalentemente con iones metálicos (mordientes) o puede reaccionar
covalentemente con el sustrato, en este caso el tejido. Los colorantes son
normalmente hidrosolubles, aunque hay colorantes que carecen de grupos
ionizables y sirven para teñir sustancias grasas, como gotas de lípidos.
TIPOS DE COLORANTES
Básicos: son sales en las que la base, normalmente una amina, aporta el
color, mientras que la parte ácida es incolora. Es decir, con colorantes
catiónicos. Tienen apetencia por sustancias ácidas del tejido como el ADN o
ciertos componentes de la matriz extracelular como los glicosaminoglicanos.
La unión es por atracción eléctrica. Así, ponen de manifiesto el núcleo y el
ARN, sobre todo el ARNr presente en los ribosomas por ser muy abundante,
así como ciertas matrices extracelulares ricas en componentes ácidos.
Ejemplos de colorantes básicos son la tionina, safranina, azul de toluidina, el
azul de metileno o la hematoxilina.
Ácidos: son sales con el anión coloreado y la base incolora. Son derivados
de grupos sulfónicos, carboxilos o hidroxilos fenólicos. Tienen apetencia por
sustancias básicas, sobre todo estructuras proteicas localizadas en el
citoplasma celular y también por el colágeno de la matriz extracelular. La
unión es por atracción eléctrica. Ejemplos de colorantes ácidos son la fucsina
ácida, verde rápido, naranja G o la eosina.
Porque donde esté vuestro tesoro, allí estará también vuestro corazón
Mateo 6:21
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Colorantes mordientes: son aquellos que se usan en combinación con
sales metálicas, que actúan como mordiente. Estas sales se pueden emplear
junto con el colorante, antes o después. En algunos casos el colorante
mordiente puede ser también aniónico o, menos frecuentemente, catiónico.
Normalmente se emplean para teñir los núcleos. Por ejemplo, la hematoxilina
férrica de Heidenhain
Neutros: poseen una porción ácida y otra básica, ambas con capacidad para
aportar color. Por tanto un mismo colorante puede teñir tanto las partes
básicas como las ácidas de los tejidos. Por ejemplo, el eosinato de azul de
metileno.
Indiferentes o hidrofóbicos: realmente no se unen a elementos de los
tejidos por afinidad química sino porque se disuelven en ellos. Por ejemplo,
el colorante sudán se disuelve en los lípidos y por tanto teñirá a las gotas de
lípidos, especialmente en los adipocitos.
Tinción especifica. Esta tinción es la base de la histoquímica es la
identificación de ciertas estructuras o substancias químicas. Estas
reacciones son especificas a las substancias correspondientes a la células y
los tejidos ej. : rojo de aceite para tinción grasa método con la hematoxilina
de Weigert específica para la detección de fibras elásticas el método de Best
para la detección de glucógeno el método de PAS es específico para
mucopolisacaridos.
TINCIÓN UNIVERSAL
Es la que se utiliza para todo tipo de tejidos y para todo
examen de rutina en un laboratorio patológico.
La hematoxilina es un colorante natural que se extrae del
corazón o duramen del árbol llamado hematoxylon
campechiaum. Este árbol se encontró por primera vez en la
región de Campeche cuyos habitantes conocían muy bien
sus propiedades tintoriales cuando los árboles crecen
durante 10 años estos se cortan y se quita la corteza y la
madera de capas externas y el corazón se corta alrededor
de un metro a los que se llama palos de campeche se los
corta en trozos para la extracción del colorante obtenido así
se los utiliza no solamente en microscopía sino también en
la industria textil. Durante muchos años fue utilizado en la
industria textil hasta que Ball Deber le dio el uso en
histopatologia en el año 1862.
El extracto natural que se obtiene de la madera se denomina hematoxilon siendo
esta una sustancia no activa primeramente debe ser oxidado o dar lugar a la
sustancia llamada hemateina.
Porque donde esté vuestro tesoro, allí estará también vuestro corazón
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Método de coloración con la hematoxilina. Se siguen dos modalidades
La tinción progresiva consiste en obtener una coloración adecuada
controlando el tiempo de la sección en el colorante, de modo que a más
tiempo más coloración.
La tinción regresiva consiste en la eliminación lenta de colorante de una
tinción que ha sido teñida en exceso. Esta eliminación se consigue
normalmente con soluciones alcohólicas y al proceso se le denomina
desteñido. La concentración de la solución y tiempo de diferenciación nos
aporta la coloración adecuada.
CLASES DE HEMATOXILINA:
HEMATOXILINA DE MAYER
Disolvente
hematoxilina
1g
Mordiente
alumbre de potasio
1000g
Subs oxidante
yodato de sodio
0,2g
Preservador
hidrato cloral
5.0g
Ácido cítrico
1g
Preparación. Se diluye primeramente el alumbre de K en 800cc de agua destilada
con la ayuda del calor en otro preferiblemente en un mortero disolvemos la
hematoxilina con agua destilada se juntan estas dos preparaciones hasta que
hierba la solución una vez que ha hervido se lleva a un recipiente de agua fría. Una
vez enfriado se coloca el hidrato cloral, el ácido cítrico el yodato de sodio se mezcla
bien todos los componentes y se procede a filtrar con papel grueso se guarda en
frascos herméticos de color ámbar no es necesario que este en refrigeración se lo
debe guardar en lugar oscuro.
La hematoxilina de Mayer es el colorante específico que acompaña a la reacción
PAS.
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HEMATOXILINA DE CARAZZI
Hematoxilina
0,5 a 2g
Agua destilada
400mL
Yodato de sodio
0,1g
Alumbre de K y Al
25g
Alcohol absoluto
10mL
Glicerina
100mL
Preparación
Solución a disolver al alumbre de potasio y aluminio en agua destilada en un Erlen
Meyer y llevar al calor.
Solución b disolver la hematoxilina o polvo de hematoxilina en el alcohol absoluto.
Juntas las dos soluciones a y b previamente enfriar para que actúen el oxidaste
yodato de sodio y finalmente echar la glicerina para su conservación.
HEMATOXILINA DE HARRIS
Hematoxilina
1g
Agua destilada
200cc
Alumbre de K y Al
20g
Alcohol absoluto
10cc
Amarillo oxido
0.5g
Rojo de Hg
Preparación
Solución a mezclar el alumbre de potasio y aluminio con agua destilada y calentar.
Solución b Disolver la Hematoxilina con el alcohol. Mezclar las 2 soluciones a y b
llevar a ebullición, enfriar y agregar poco a poco el óxido rojo de Hg sino se cuenta
con el óxido rojo de Hg se puede usar también el óxido amarillo de Hg
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EOSINA
Preparación de la eosina alcohólica. Esta compuesta por:
Solución stock o madre:
Colorante de eosina yellow (amarillo)
1-5 g
Agua destilada
20 ml
Alcohol absoluto
80 ml
Se puede usar de 1-5 g para solución stock, dependiendo la acción de la eosina.
Solución trabajo:
Solución stock
25 ml
Alcohol (absoluto) 80%
75 ml
La solución stock, se la preserva añadiendo unas gotas de cristales de timol, o
algunas gotas de formol al 10%. Como colorante, citoplasmatico también se puede
utilizar a la safranina, que es de constitución alcohólica. La eosina llamada también
colorante de contraste o secundaria, es aquella que se va a fijar directamente al
citoplasma de las células.
BATERIA DE TINCION.- Es un conjunto de frascos o cubetas que contengan
sustancias que nos ayuden con la tinción y entre esta batería podemos
encontrar el Xilol y Alcoholes.
Procedimiento de tinción. Una vez obtenido el corte, esta se lleva a la fase de
coloración o tinción en el primer lugar por el método de tinción universal formada
por:
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1er COLORANTE
HIDRATACION
DESPARAFINADO
PROCEDIMIENTO
PARA LA TINCION
XILOL
TIEMPO
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20
mi
n
OBJETIVOS
RESULTADOS
Elimina de manera
progresiva la parafina
existente al realizar la
inclusión.
Tiene la capacidad para
disolver el poliestileno de
la parafina (después de la
diafinizacion).
Fortalecer al tejido de
tal manera que se
encuentre activa para
la inmersión en el
colorante hídrico.
Rehidratar la muestra de
tejido
de
manera
decreciente
de
tal
manera que se encuentre
activa al momento de
captar los colorantes.
El componente activo de
la
hemateina
que
contiene
cargas
negativas
lograra
la
atracción necesaria para
la oxidación.
XILOL
20
mi
n
ALCOHOL
ABSOLUTO
100%
2
mi
n
ALCOHOL
CORRIENTE
90%
2
mi
n
ALCOHOL
CORRIENTE
80%
2
mi
n
HEMATOXILINA
Tiñe a todas las
estructuras
que
5-7 contienen acido de
mi color morado (como
n
el
ácido
desoxirribonucleico
del núcleo).
DIFERENCIADO
R
AGUA
CORRIENTE
DIFERENCIADO
R ALCALINO
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Quita el exceso de
colorante
30
se
g
Mordiente que suministra
cargas (+), que actúan
Fijar el colorante
como puentes químicos
nuclear, dando color a
para unirse a las cargas (la hematoxilina
) de la hemateina graba el
color en las células.
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2do COLORANTE
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DIFERENCIADO
R ACIDO
30
se
g
EOSINA
Colorear
componentes
y
orgánulos
1-3
citoplasmáticos
mi
colágeno y fibras
n
musculares y todo
componente acidofilo
o eosinofilo.
ACLARADOR DESHIDRATACION
ALCOHOL
2
CORRIENTE 80 mi
%
n
ALCOHOL
CORRIENTE 90
2
%
mi
ALCOHOL
n
ABSOLUTO
100%
XILOL
XILOL
5
mi
n
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Estabiliza al colorante
Incrementa la precisión
y al mismo tiempo
de la tinción nuclear.
previene la oxidación.
Compuesto acido basado
en su polaridad negativa
para adherirse a células
de carga positiva.
Deshidrata y evita la
contaminación
con Retira
todas
las
hongos.
moléculas de agua al
punto de secado, con el
fin de mantener y
las
Deshidratar
la preservar
muestra del tejido de características tintoriales
del tejido después de la
manera creciente.
coloración.
Aclarante
Aclara el tejido terminado
para la observación en el
microscopio
manteniendo
su
contraste.
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RESULTADOS:
•
Núcleos:
•
Citoplasma: Rosado
•
Glóbulos
Naranja o rojo
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Morado
Rojos:
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