nov_2002_01

EDITORIAL
El embate de la mancha blanca ha
conllevado a que instituciones como el
CENAIM (Ecuador), desarrollen esta
investigación relacionada al manejo del
cultivo del camarón y ocurrencias del
WSSV expuesto a temperaturas y
carcasa
de
camarón
infectado,
apreciándose
mejoras
en
las
supervivencias,
lo
cual
permite
vislumbrar a futuro una salida al
estancamiento que esta sometida la
actividad camaronera en esta parte del
hemisferio. Por otro lado, se presenta
un reporte de la situación actual en
avances de investigación nutricional de
camarones así como técnicas de buen
manejo sostenible, amigable con el
medio ambiente y que permite reducir
los costos de alimentación.
Edición Tumpis
Editores
Dagoberto Sánchez
[email protected]
Luis Miguel Zapata
lzapatav@alicorp com pe
TEMPERATURA Y WSSV: ESTUDIOS PROMETEDORES
DEL CENAIM SOBRE TECNICAS DE CULTIVO DE
AMARON ADVOCATE, Agosto 2002: 55-57
S. Sonnenholzner,* J. Rodriguez, J. Calderón
La producción de camarón en Ecuador ha declinado
significativamente en los últimos tres años debido a
mortalidades causadas por el Síndrome del Virus de la
Mancha Blanca (WSSV). Tasas de supervivencia por
debajo de 20% aún son comunes en estanques de engorde
sembrados a 8-10 camarones/m2. Sin embargo, entre
Enero y fines de abril, la supervivencia reportada
incrementaron a un promedio de 25-30% y algunas veces
hasta 40%.
Temperaturas cálidas y lluvias caracterizan esta estación
en Ecuador e históricamente los rendimientos de camarón
son más altos durante este periodo. La productividad
natural asociada con el día prolongado y mayor luminosidad
también se incrementan durante este parte del año, por lo
que probablemente contribuyan a la salubridad del camarón
vía mejora nutricional a partir de la productividad natural del
estanque.
Investigación sobre la temperatura
Los resultados de investigación reportados el año pasado por el Centro Corporativo de
Investigación en Colombia (CENIACUA) presentaron la evidencia de mayor supervivencia de
Penaeus vannamei expuesto con WSSV cuando era mantenido a 31.7 °C, comparado a
camarón expuesto a menores temperaturas. El Centro Nacional de Acuicultura e Investigaciones
Marinas de Ecuador (CENAIM) expandió esta investigación y también investigó la respuesta
inmune e histología de camarones juveniles expuestos a infecciones de WSSV. Los resultados
prometedores obtenidos bajo condiciones de laboratorio conllevó a experimentos de cultivo de
camarón bajo estructuras de invernaderos.
Confrontación con WSSV en Laboratorio
A inicios de Febrero del 2001, una serie de pruebas de exposición conducidas en el CENAIM en
Guayaquil, Ecuador, expusieron juveniles de P. vannamei a diferentes temperaturas de agua.
Los experimentos fueron amplificados ascendentemente desde frascos de 2 l a tanques de 200 l.
Las infecciones fueron efectuadas alimentando tejido infectado de camarón con WSSV a
camarones experimentales en acuarios a temperaturas seleccionadas.
Supervivencia
En un primer grupo de experimentos realizados, se infectaron camarones de 1.5 a 2.5 g y que
fueron mantenidos a temperaturas de 27°, 30° y 33 °C. Se observaron tasas de supervivencia por
Volumen 7 – Edición 01 – Noviembre 2002
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encima del 90% para los animales mantenidos a 33°C después de ocho días, en comparación a
los otros tratamientos de temperatura, los cuales tenían tasas de supervivencia de 0-58%.
Un segundo grupo de experimentos fueron conducidos con tratamientos que comprendían a
camarones infectados de 0.8 a 1.5 g sujetos a los regímenes de temperatura en la Tabla 1.
Todos los tratamientos tenían temperaturas de agua de 27 °C hasta el día 8. Los tratamientos
C y D comenzaron a presentar mortalidades después de 24 horas de la infección (Figura 1). Sin
embargo, las mortalidades en el tratamiento C se detuvieron después de elevar la temperatura a
33 °C, 48 horas después de la infección. El tratamiento D continuó con tasas de mortalidad
acentuadas que se nivelaron casi el día 10, con tasas de supervivencias finales de 8% al final del
experimento.
Tabla 1. Condiciones de Tratamiento Experimental.
Tratamie
Condiciones
nto
A
33 °C por 48 horas, luego 14
días a 27 °C
B
33 °C por 8 días, luego 8 días a
C
27 °C
D
27 °C por 48 horas, luego 33 °C
por 6 días, luego 27 °C por 8
días
27 °C por 16 días
Las mortalidades de tratamiento del grupo C se resumieron ligeramente después de que las
altas temperaturas se suspendieron en el día 8. La supervivencia final en este grupo fue 73%.
Las mortalidades en el grupo de tratamiento A fueron retrasadas por unos cuantos días,
probablemente debido a los dos días iniciales del efecto del tratamiento de 33° C la supervivencia
final fue de 38% aunque se observó alta variabilidad dentro de las tres réplicas. El tratamiento del
grupo B tuvo la supervivencia mas alta (99%).
Inicio de la Ocurrencia
El inicio clínico de la enfermedad y de la infección fue observada después de 24-36 de
infección experimental. Las observaciones concuerdan con aquellas realizadas por Tang y
Lightner (2000), quienes describieron un incremento en 140 veces de la carga viral en tejidos 2435 horas después de la infección. Sin embargo, aunque el virus estaba completamente
establecido en los animales en este momento, las mortalidades podían ser detenidas si es que se
incrementaba la temperatura, sugiriendo que incluso a altos niveles de infección, el camarón
podría tener una reacción contra el virus.
Volumen 7 – Edición 01 – Noviembre 2002
2
100
90
80
Supervivencia (%)
70
60
50
40
30
20
10
0
1
2
3
TRATAMIENTO A
4
5
6
7
8
9
10
11
Días Después de la Infección
TRATAMIENTO B
12
TRATAMIENTO C
13
14
15
16
TRATAMIENTO D
Figura 1. Tasas de supervivencia de juveniles de P. vannamei expuestos a WSSV en dos
temperaturas de agua. Las barras representan el error estandar.
Tratamiento A = camarón infectado a 33 °C, mantenido a 33 °C por 48 horas; y luego a 27 °C por
6 días; B = camarón infectado a 33 °C por 48 horas; y luego mantenido a 33 °C por 8 días; C =
camarón infectado a 27 °C, mantenido a 27 °C por 48 horas y luego a 33 °C por 6 días; D =
camarón infectado a 27 °C y mantenido a 27 °C por 8 días.
Las tasas de supervivencia mantuvieron buena relación con el grado de infección por
histología, pero no la prevalencia determinada por la prueba de WSSV de reacción de cadena
polimerasa (PCR) en la población de camarones. La prevalencia aparente fue 100% en todos los
grupos de tratamientos 24 horas después de la infección. Sin embargo la carga viral medida
mediante PCR del grupo de tratamiento B fue muy baja en comparación a los otros grupos de
tratamiento. Estos resultados sugieren que el virus fue capaz de infectar al camarón en las 24
horas a las temperaturas probadas y que la tasa de supervivencia a 33 °C no fue causada por la
inactivación viral.
Respuesta Inmune e Histología
Volumen 7 – Edición 01 – Noviembre 2002
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La respuesta inmune fue evaluada mediante conteos totales de hemocítos (THC) en
diferentes tiempos después de la infección. Un ligero incremento en el numero de hemáticos fue
observado después de 24 horas de infección en los grupos de tratamientos B y D. La proliferación
fue de vida corta, ya que 48 horas después de la infección, disminuyó el numero de hemocítos.
Esta reducción alcanzó su nivel mas bajo, tres días después de la infección. En el cuarto día, los
hemocítos en el Grupo B saltaron de regreso a los niveles iniciales y continuaron proliferando de
allí en adelante, mientras que el THC en el tratamiento D se mantenía descendiendo hasta el final
del muestreo.
Las observaciones histológicas sugirieron que todos los animales en prueba fueron capaces
de responder rápidamente al ataque viral por encapsulación y que esta respuesta fue
proporcional al grado de infección. La encapsulación observada 36 horas después de la infección
podría ser responsable por algo de la disminución en hemocitos en circulación y la desaleración
en el proceso de infección observado dos días después de la infección. La proliferación de
hemocitos no fue observada en camarones del grupo de tratamiento D (27 °C).
El conteo diferencial de hemocitos sugiere que las células semigranulosas y granulosas fueron
responsables por la encapsulación observada y la infiltración, debido a que sus concentraciones
disminuyeron; mientras que la concentración de hemocitos hialinos permaneció relativamente
estable. Al mismo tiempo que los hemocitos comenzaron a proliferar en el grupo de tratamiento
B, se observó una masiva infiltración hemocítica – un estado de máxima alerta inmunizara. Los
animales altamente infectados que sobrevivieron al final del experimento en el grupo de
tratamiento D mostraron picnosis y Kariorepsis masiva.
Tabla 2. Desenvolvimiento del camarón en el experimento de invernadero (Diciembre 2001Enero 2002).
Peso
Rendimie Superviven
Sistemas
Siembr Días Promedi
nto
cia
o
a
(kg/ha/día
(%)
(g)
(Pl/m2)
s)
Invernadero 3
98
33
1.8
43.4
80.9
Invernadero 7
91
25
1.5
37.9
69.4
Invernadero 10
93
25
1.3
38.6
79.5
Estanque
110
26
0.9
31.8
83.9
abierto 1
11
26
1.1
26.7
56.9
Estanque
112
26
0.9
19.8
50.7
abierto 4
Estanque
abierto 11
Las Temperaturas Altas Disminuyen la Infección
Estos resultaron indicaron que el camarón a 33 °C requiere aproximadamente cuatro días
para obtener la mas alta respuesta celular, mientras que a 27 °C, el virus es capaz de invadir los
tejidos en solamente 36 horas. Las mortalidades masivas causadas por el WSSV pueden ser
debido a su alta velocidad de replica y capacidad para infectar varios tejidos – incluido el tejido
hematopoyético – antes que los animales puedan producir una respuesta efectiva.
Volumen 7 – Edición 01 – Noviembre 2002
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La proliferación de hemocitos y la resistencia del camarón a las infecciones de WWSV bajo
condiciones hipertermicas (33 °C en nuestras pruebas) permanecen aun por ser investigadas. La
inducción de proteínas de shock térmico (HSP) o proteínas de estrés bajo condiciones
hipertérmicas también requieren investigaciones posteriores.
La expresión de HSP han probado jugar un rol clave en la regulación del desdoblamiento y
copiado de proteínas con proteínas afectadas en mamíferos, peces y moluscos. La integridad de
la proteína y función de los hemocitos en el camarón podría ser favorecido por la expresión de
HSP, restableciendo las condiciones celulares y fisiológicas que fueron afectadas por el virus.
Experimentos de Invernadero
El CENAIM construyó seis estructuras de invernadero sobre estanques de tierra de 550
m2 para investigar la factibilidad de producción intensiva de camarón en una región donde es
prevalente el WSSV. Estos sistemas experimentales estuvieron ubicados en una granja
camaronera cerca de Churute- Taura en la Provincia del Guayas.
El primer experimento, se inició en diciembre del 2001 y consistió en la comparación de la
supervivencia y crecimiento de camarón estabulado en tres estanques con invernaderos y tres
estanques abiertos de tierra después de 33 días de cultivo. Un segundo experimento en Enero
del 2002 involucraba una fase de pre-cría de 49 –56 días y fase de engorde de 45 días.
Tabla 3. Segundo experimento invernadero – fase de pre-cría (Enero – Marzo 2002).
Sistemas
Invernadero 3
Invernadero 6
Invernadero 7
Invernadero 9
Invernadero 10
Peso
Rendimie Superviven
Siembr Días Promedi
nto
cia
a
o
(kg/ha/día
(%)
(Pl/m2)
(g)
s)
188
45
3.5
59.1
40.1
172
45
3.0
55.5
48.3
174
56
3.9
32.0
29.3
171
56
4.1
34.5
30.9
178
56
3.3
46.3
51.6
Temperatura
Los promedios de temperatura del agua de los invernaderos estuvieron por encima de 32
°C durante la estación calurosa desde Diciembre 2001 a Mayo 2002, con temperaturas tan altas
como 37 °C. Los estanques de tierra abiertos, tuvieron temperaturas que promediaron 27.3 °C en
Diciembre. Ellos alcanzaron un pico de 30.6 °C durante Abril y declinaron de allí hacia delante a
26.2 °C durante Julio.
Las temperaturas del agua de invernaderos en los invernaderos registrados en Junio y Julio
fueron en promedio 31.0 y 29.6 °C, respectivamente, La temperatura del agua en los
invernaderos durante el periodo Diciembre – Julio promedio 3-4 °C mas que en los estanques
abiertos. Las temperaturas del agua dentro de los invernaderos podían llegar tan alto como 52 °C
durante los meses calurosos de Enero a Abril.
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Tabla 4. Segundo experimento invernadero – fase de engorde (Marzo – Mayo 2002).
Sistemas
Invernadero 3
Invernadero 6
Invernadero 7
Invernadero 10
Peso
Rendimie Superviven
Siembr Días Promedi
nto
cia
a
o
(kg/ha/día
(%)
(Pl/m2)
(g)
s)
42
45
10.9
2,978
65.0
40
45
10.5
2,638
62.6
24
45
8.5
1,453
69.9
34
45
9.1
1,947
63.6
Resultados. Experimento 1
Los promedios de las tasas de rendimiento, crecimiento y supervivencia fueron
significativas (P<0.05) en los sistemas de invernaderos cuando fue comparado a los sistemas
abiertos (Tabla 2). Las ocurrencias de WSSV fueron registradas una vez, varios días previos a la
cosecha y la evaluación de los estanques abiertos 4 y 11. Si el experimento hubiera continuado,
la supervivencia del camarón hubiera sido mucho menor. El camarón continuo muriendo en los
estanques a los que fue transferido. Setenta camarones de cada invernadero y de cada estanque
abierto fueron analizados mediante PCR, habiéndose hallado negativo al PCR todas las muestras
de invernadero.
Resultados. Experimento 2
Los datos de producción para las fases de pre-cría y de engorde son presentados en la
tabla 3 y 4. Las tasas de supervivencia durante la fase pre-cría fueron comparativamente menor
(29-52%) comparadas con aquellas del primer experimento de invernaderos. las mortalidades no
fueron causadas por el WSSV; Sin embargo, fueron atribuidas a episodios de menos de 2.0 mg/L
de oxígeno que ocurrió varias veces debido al corte de fluido de energía.
La supervivencia mejoró durante la fase engorde. Los rendimientos variaron desde 1,453
– 2,978 kg./ha, los cuales son notablemente mayores que los rendimientos de 180-300 kg./ha
cosechados en estanques comerciales con ocurrencias de WSSV. Como una referencia, los
rendimientos históricos de producción previos a la aparición del WSSV eran 722 kg./ha/año.
Conclusión
Los resultados de las pruebas de CENAIM indican que puede tomar hasta 4 días a 3 °C
para que el camarón infectado por WSSV desarrolle la respuesta celular mas alta a la infección
(como ha sido evaluada por el conteo de hemocitos totales), mientras que a 27 °C, el virus puede
invadir los tejidos en solamente 36 horas. Para mantener las temperaturas mas altas, los
invernaderos pueden ser una alternativa de producción viable para los granjeros de camarón en
Ecuador y otras partes.
Los sistemas de invernadero probados produjeron significativamente (P<0.05) mayor crecimiento
supervivencia y rendimiento que los estanques abiertos adyacentes. No se detectó infecciones de
WSSV en el camarón de invernadero, pero el WSSV causó mortalidades en estanques abiertos.
Nota: las referencias citadas están disponibles a partir de los autores.
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