Análisis del agua S Objetivos S Determinar la presencia de bacterias coliformes en una muestra de agua Introducción S Las tres pruebas básicas para determinar la presencia de bacterias coliformes (asociada con materia fecal) en el agua son: S La prueba presuntiva S La prueba de confirmación S La prueba completa Pruebas para determinar bacterias coliformes S Las pruenbas se realizan secuencialmente para cada una de las muestras. S Bacterias coliformes S Bacterias gram negativas S Bacilos S No formadoras de esporas S Anaerobos fermentativos S Fermentan lactosa Coliformes fecales Microbiología Agua spp. S Incluyen E.coli algunas Klebsiellade y Enterobacter ¿Qué es un coliforme? Grupo de especies de varios géneros Klebsiella pneumoniae Escherichia coli Citrobacter freundaii Enterobacter aerogenes Prueba Presuntiva S Es una prueba específica para determinar la presencia de bacterias coliformes. S Se realiza agregando alícuotas de muestra de agua que se quiere evaluar en caldo de fermentación que contienen lactosa y que posea un tubo invertido. S Un resultado positivo de esta prueba indica que la muestra de agua no es potable. Prueba de Confirmación S Confirman la presencia de bacteria coliformes en muestras de aguas que dieron resultados positivos a las pruebas presuntivas. S Un resultado positivo de una prueba presuntiva debe confirmarse ya que resultados positivos pueden deberse a organismos de origen no coliformes que no son reconocidos como contaminantes causados por materia fecal. Coliformes S En la prueba de confirmación se usa Eosine Methylene Blue (EMB) un medio de cultivo selectivo y diferencial o Endo Agar. S El EMB contiene azul de metileno que inhibe el crecimiento de organismos gram positivos ( selectivo). S En un ambiente ácido, EMB forma un complejo que se precipita sobre las colonias coliformes y produce un centro negro y borde verde metálico (diferencial). S Esta reacción es característica para Escherichia coli., el principal indicador de contaminación con materia fecal. S El Endo Agar tiene el colorante fuchsina y en presencia de ácidos producidos por las bacterias coliformes, la fuchsina forma un complejo de color rosado obscuro que convierte a la colonias coliformes y sus alrededores en color rosado. Prueba Completa S Análisis final de la muestra de agua. Se utiliza para examinar las colonias coliformes que aparecieron en el medio EMB en la prueba de confirmación. S Se selecciona una colonia aislada para ser transferida a un tubo con caldo de lactosa y se siembra en un tubo con agar inclinado para hacer la tinción Gram. S Despúes de hacer la inoculación y la incubación, los tubos que muestren la formación de gas en el caldo de lactosa y den positivos en la tinción Gram (Gram negativos) comprueban la presencia de bacterias coliformes en la muestra de agua. Parte Práctica Prueba Presuntiva S Mezcle las muestras de agua. S Agregue con una pipeta estéril 1 mL de la muestra de agua a tres tubos de LB1X y a tres tubos LB 2X LB1X= Caldo con lactosa S LB 2X=Caldo con doble concentración de lactosa S S Saque los gases del tubo durham S Incube los tubos por 48 horas a 37 grados. S Si se observa la presencia de gas en el tubo durham es muy posible que tengan bacterias coliformes. S Resultados positivos se realiza la prueba de confrmación Parte Práctica Prueba Confirmativa S Cultivos que dieron positivos a la presuntiva se utilizan para esta parte. S Identificar placas petri debidamente. S Transferir bacterias del medio de cultivo de la prueba presuntiva a las placas de EMB utilizando la técnica de siembra por dilución. S Incubar todas las cajas petri en posición invertida a 37 grados por 24 horas. S Observar placas y guardar para realizar prueba completa. Parte Práctica Prueba Completa S Inocular en tubos con caldo de lactosa y agar inclinado con las colonias aisladas en EMB . S Incubar todos los tubos durante 24 horas a 37 grados. S Observar los tubos y hacer la tinción Gram.