Detección por RT-PCR múltiple de la respuesta inflamatoria

SPANISH NATIONAL RESEARCH COUNCIL (CSIC)
Detección por RT-PCR múltiple de la respuesta inflamatoria dependiente e
independiente de interferón
El CSIC ha diseñado una RT-PCR múltiple para la detección de la activación no específica de genes
relacionados con la inflamación, dependientes e independientes de interferón, cuando se transforman
las células con RNA o con oligodesoxinucléotidos (ODN) fosforotioatos para lograr el silenciamiento
genético. La concentración de Mg+2, temperatura de alineación, número de ciclos, diseño de
cebadores y cantidades relativas de cada una de las 5 parejas de los mismos se han optimizado para
permitir la detección de esta activación en diferentes tipos celulares transformados con diferentes
RNAs u ODN.
Se buscan compañías interesadas en una licencia de patente
Nueva herramienta útil en los estudios de silenciamiento genético
La introducción en las células de algunos RNA o de oligonucleótidos
fosforotioatos para inhibir la expresión de genes específicos con fines
experimentales o terapéuticos puede provocar una respuesta inflamatoria
inespecífica que condiciona y puede llegar a hacer inviable las aplicaciones
deseadas.
El CSIC ha desarrollado una RT-PCR múltiple para la detección simultánea de la
expresión de 3 genes de la respuesta a interferón (OAS2, ISG56 e IFNα ó
IFNβ) y del gen de la citoquina proinflamatoria IL-8 (independiente de
interferón), así como de un control (GAPDH) en condiciones no
convencionales, optimizadas respecto a la concentración de Mg+2, temperatura
de alineación, número de ciclos, diseño de cebadores y cantidades relativas de
cada una de las 5 parejas de los mismos.
Esta RT-PCR múltiple es eficaz para determinar en una única reacción, si se
activa la respuesta inflamatoria y si esta es dependiente de interferón o no con
diferentes líneas celulares (derivadas de linfocitos, glias, y células renales) y con
distintos tipos de ácidos nucleicos (ssRNA, dsRNA sintético poli I:C, siRNA) y
un oligonucleótido fosforotioato (ODN2006).
1
2
3
4
5
OAS2
IFNα
IL-8
GAPDH
ISG56
Resultados obtenidos por mRTPCR en muestras de RNA de la
línea celular 293T. Carril 1, sin
transfectar (control). Carril 2,
transfectada con ssRNA. Carril 3,
transfectada con dsRNA. Carril 4,
expresando establemente TLR9
(Control). Carril 5, expresando
establemente TLR9, estimulada con
OD2006.
Principales aplicaciones y ventajas
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Permite determinar simultáneamente la respuesta a interferón y la
respuesta inflamatoria no dependiente de interferón.
Estado de la patente
Al estar basado en una RT-PCR múltiple, se determina simultáneamente la
expresión de 5 genes en una única reacción, lo que hace que sea un
método sencillo, rápido, seguro, sensible, reproducible y económico.
Para más información:
Requiere una menor manipulación de las muestras por lo que disminuye los
errores de manipulación y el riesgo de contaminaciones.
Solicitud de patente española
Iratxe Cano, Ph.D.
Área de Ciencias de la Vida
Vicepresidencia
Adjunta
de
Transferencia de Conocimiento
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Científicas (CSIC)
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