Patología respiratoria

INFORME N° 1
13 años/sexo femenino
PROCEDIMIENTO: BIOPSIA
ÓRGANO: LARINGE
Macroscopía:
Varios fragmentos irregulares de tejido blanquecino, el mayor de ellos mide 0,3cm
de diámetro mayor.
Diagnóstico:
LARINGE, BIOPSIA
PAPILOMA ESCAMOSO COMPATIBLE CON ETIOLOGÍA VIRAL.
Lea atentamente el informe anatomopatológico y responda:
1) ¿Cuál/es habrán sido los hallazgos histopatológicos que hicieron pensar al
patólogo que se trataría de una lesión de origen viral?
2) Con el mismo material de la biopsia se realizó un segundo estudio de PCR
para detección y tipificación del virus del HPV. (véase informe adjunto). Lea
atentamente el mismo e interprete cual es el resultado de dicho estudio y
explique cual es el pronóstico de este tipo de lesión.
DETECCIÓN Y TIPIFICACIÓN DE HPV POR PCR MÁS TIPIFICACIÓN
N° Protocolo
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Material
Taco de parafina
(fijación en formol
10%)
Órgano
Laringe
Lateralidad
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TÉCNICA REALIZADA
Amplificación de ADN mediante la técnica de PCR (reacción en cadena de la
polimerasa) para detección de virus HPV y posterior tipificación por RFLP
(polimorfismo de longitud de los fragmentos de restricción)
METODOLOGÍA
Se realizó extracción de ácidos nucleicos (ADN) altamente purificados con
columnas de purificación (Quiagen), utilizando doble ciclo de purificación para
eliminar totalmente inhibidores de PCR, a partir de la muestra (biopsia incluida en
parafina). Luego se realizó amplificación por reacción en cadena de la polimerasa
(PCR) con cebadores específicos complementarios de la región “L1-ORF”
(My09/My11), secuencia altamente conservada en la mayoría de los subtipos de
virus HPV. Posteriormente se realizó electroforesis del producto de PCR en geles
de poliacrilamida no desnaturalizantes al 5% y tinción de bromuro de etidio.
Finalmente se realizó corte del producto de PCR obtenido con enzimas de
restricción (BamHI, Ddel, Haelll, Hinfl y Pstl) y corrida del producto digerido en gel
de poliacrilamida al 6% teñido con bromuro de etidio.
Controles de PCR para HPV: Control positivo: ADN de HPV (C+), Control
negativo: ADN de sangre periférica normal (C-), Control de amplificación:
amplificación de un fragmento del gen de la beta-globina con el ADN de la
muestra, y Blanco de amplificación: ausencia de ADN (B). Controles de RFLP:
Producto de PCR (My09/My11) de virus HPV subtipo 18.
CONCLUSIÓN Y RESULTADOS
Las técnicas realizadas sugieren la presencia de virus HPV en el material
estudiado. La tipificación a través de la técnica de RFLP presenta un patrón de
bandas vinculable con subtipo 6 (BAJO RIESGO) en el material estudiado.
NOTA: Se sugiere correlacionar el presente resultado con los datos clínicos,
imágenes, citologías recientes y/o resultados histopatológicos. El resultado del
presente estudio no debería ser interpretado en forma aislada. En caso de
discordancia se sugiere realizar, en eventuales lesiones futuras, nueva toma de
muestra para detección de HPV por PCR y subtipificación por RFLP (polimorfismo
de longitud de los fragmentos de restricción).
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72 años/sexo Masculino
Material: Resección
Lateralidad: Derecho
INFORME N° 2
Órgano: Pulmón
Macroscopía:
I.
Lóbulo superior derecho: que mide 16x10x3cm más sutura mecánica de
3,5cm. Pleura congestiva en la que se reconoce un área de aspecto
despulido que mide 3,5 x 2,5cm. Al corte, a dicho nivel se reconoce un
nódulo blanquecino de bordes poco definidos y consistencia firme de 3 x
2,2cm y se halla a 4cm del hilio y a 5cm de la sutura mecánica. El resto del
parénquima presenta aspecto grisáceo y consistencia esponjosa.
II.
Ganglio grupo IX: Ganglio linfático que mide 0,8cm de diámetro.
III.
Grupo XI: Un ganglio linfático de 0,7cm de diámetro.
IV.
Grupo IV: Dos ganglios linfáticos, el mayor de 0,8cm de diámetro.
Microscopía:
I.
Los cortes histológicos muestran proliferación tumoral atípica constituida
por células con núcleos pleomórficos grandes e hipercromáticos y con
escaso citoplasma. Dichas células se disponen en nidos, en áreas son poco
cohesivas. En algunos grupos se observa tendencia a disposición en
empalizada y queratinización aislada intracitoplasmática. Se acompaña de
marcada reacción desmoplásica y antracosis. Moderado infiltrado
inflamatorio mononuclear. En un sector la pleura se halla retraída y allí
algunas células tumorales llegan a la misma. Hay además infiltración de
algunas estructuras bronquiales, una de ellas con revestimiento tumoral. Se
hallan embolias vasculares. El parénquima circundante muestra algunas
bullas subpleurales, áreas de antracosis, focos de infiltrado mononuclear y
enfisema.
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Margen de resección bronquial con hiperplasia del epitelio de revestimiento,
sin infiltración tumoral. Se disecan 3 ganglios hiliares con áreas de
antracosis.
II.
Dos fragmentos de ganglio linfático con áreas de antracosis.
III.
Ganglio con áreas de antracosis y leve histiocitosis sinusal.
IV.
Ganglio con áreas de antracosis.
Diagnóstico:
PULMÓN, DERECHO, RESECCIÓN.
I.
LÓBULO SUPERIOR DEL PULMÓN DERECHO
CARCINOMA EPIDERMOIDE CON INFILTRACIÓN PLEURAL
II.
GANGLIOS GRUPO IX
III.
GANGLIOS GRUPO XI
IV.
GANGLIOS GRUPO IV
II, III y IV: GANGLIOS SIN METÁSTASIS
Lea atentamente el informe anatomopatológico y responda:
1) Teniendo en cuenta la descripción microscópica: ¿Qué es lo que justifica el
diagnóstico de carcinoma epidermoide?
2) Teniendo en cuenta el diagnóstico de carcinoma epidermoide, la infiltración de
la pleura, tiene alguna implicancia en el pronóstico? Justifique su repuesta.
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INFORME N° 3
73 años/sexo Femenino
Material: Taco de biopsia fijada en formol 10% e incluida en parafina
Órgano: Pulmón
Lateralidad: Izquierdo
Histopatología de la muestra: Adenocarcinoma bien diferenciado con áreas BAV
(20%). Porcentaje tumoral en la muestra: 80%.
Práctica realizada: Análisis de mutaciones de EGFR (Receptor del Factor
Epidérmico de Crecimiento) en NSCLC (Cáncer de Pulmón No Células pequeñas)
Procedimiento Diagnóstico Molecular:
 Micro disección de las áreas tumorales con control microscópico por el
patólogo previa a la extracción de ADN.
 Extracción de ácidos nucleicos (ADN) altamente purificados con columnas
de purificación (Quiagen), utilizando doble ciclo de purificación para eliminar
totalmente inhibidores de PCR, a partir de cortes de 10 um de tejido fijado
en formol 10% e incluido en parafina.
 Secuenciación completa bidireccional de los exones 18, 19, 20 y 21 del
dominio tirosin kinasa del gen EGFR en la muestra. Todas las técnicas se
realizaron con adecuados controles y de acuerdo a estándares
internacionales publicados en la bibliografía.
 Confirmación de los exones mutados por análisis repetido.
 Análisis de las secuencias con software específico y reporte de tipo/s de
mutaciones halladas, cambio/s específico/s en la secuencia del ADN, y
efecto clínico referido en la bibliografía para la/s mutaciones halladas.
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Resultados y Conclusiones:
En la muestra analizada se detectó una mutación en el exón 19 del gen EGFR:
del E746-A750 (2235-2249 del GGAATTAAGAGAAGC). La misma se halla
asociada, en la bibliografía reportada, con sensibilidad a los inhibidores de la
tirosin kinasa.
Se halla también un polimorfismo (CAA x CAG) en el codón 787 del exón 20, el
cual codifica para el aminoácido Q (glutamina). El cambio no tiene impacto
clínico demostrado, ya que no produce cambios en la secuencia de la proteína.
Lea atentamente el estudio de Patología Molecular y responda:
1) ¿Cuál es el rol del EGFR en el Cáncer de Pulmón No Células Pequeñas
(NSCLC)?
2) Analice los resultados y las conclusiones obtenidos en dicho estudio y
explique brevemente cual es el significado de tales hallazgos y que
implicancia tiene en el pronóstico de este tipo de patología.
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