EVALUACIÓN Y DESARROLLO DE UNA FITASA COMO ADITIVO EN ALIMENTOS PARA CAMARÓN BLANCO DEL PACÍFICO (Litopenaeus vannamei) Y PRODUCCIÓN DE SU FORMA RECOMBINANTE. Resumen Ejecutivo Durante los últimos años las fitasas han despertado el interés de científicos y del sector productivo tanto en el área de nutrición, protección ambiental y biotecnología. Estas enzimas hidrolíticas catalizan la liberación de fosfato del fitato, el cual constituye la principal fuente de fósforo en cereales y semillas oleosas. Se utilizan como suplemento en dietas alimenticias de animales monogástricos para mejorar la asimilación de fósforo y otros nutrientes, además de reducir la contaminación con fósforo producida por la excreta de los animales de granja. En los últimos años, la industria acuícola camaronera ha considerado la alternativa de substituir la harina de pescado por fuentes vegetales y el empleo de enzimas como aditivos nutrimentales, entre ellas la fitasa, para mejorar el valor nutricional de estas fuentes. Sin embargo, en los pocos estudios realizados en camarón, no se ha encontrado un efecto positivo significativo posiblemente a que las fitasas disponibles de forma comercial han sido optimizadas principalmente para su empleo en la producción de cerdos y aves. A pesar de los avances logrados con el empleo de la fitasa como aditivo alimenticio, ninguna fitasa disponible comercialmente, satisface hasta el momento con todos los requerimientos ideales para cada aplicación industrial específica, como son que sea efectiva en diferentes especies animales, estables al almacenamiento y al tratamiento del calor durante el procesado de los alimentos y competitivas en costos de producción. Por lo anterior el proyecto desarrolló un proceso de producción de una fitasa para su empleo como aditivo en las formulaciones alimenticias empleadas en la nutrición de camarón, con el fin de mejorar la digestibilidad de ingredientes vegetales en alimentos balanceados para la acuacultura, utilizando para la producción recombinante de esa fitasa, la levadura Pichia pastoris. Demanda o problemática que atiende El sector productivo demanda información sobre la evaluación y el desarrollo de fitasas que reúnan las características biológicas y fisicoquímicas para su aplicación como aditivo en alimentos para camarón. Por lo que dentro de las demandas estratégicas propuestas por SAGARPA en el área de biotecnología aplicada se incluyó el mejoramiento de la digestibilidad de los ingredientes portadores de fitatos que componen los alimentos balanceados en la acuacultura. Resultados obtenidos y/o Descripción-Características de la tecnología generada -La información científica y técnica sobre la caracterización biológica y fisicoquímica de la fitasa C del Bacillus subtilis nativa y recombinante y comparada con dos fitasas comerciales de origen fúngico, generó los criterios técnicos para determinar la elección de alguna fitasa para una aplicación específica, lo cual permitirá aumentar la eficiencia y eficacia de ésta sobre el proceso aplicado, así como la disminución de los costos del proceso. -Los niveles de producción de la fitasa C recombinante a partir de P. pastoris son mucho mayores que los de la fitasa C nativa a partir de su fuente natural, resultando se P.pastoris una muy buena alternativa biotecnológica para la producción de esa fitasa de interés comercial. -Se desarrolló un proceso fermentativo en un volumen de 5 litros, para establecer las condiciones favorables para la producción de la fitasa C recombinante en Pichia pastoris, se obtuvieron niveles de producción positivas, sin embargo no lo suficientes para un escalamiento industrial económicamente competitivo. Se puede mejorar el proceso y aumentar los niveles de producción, pero por las características catalíticas de la enzima, su baja actividad específica limitan el sistema. A pesar de todo ello se sugiere realizar un estudio de costos para el escalamiento del proceso y conocer si es factible económicamente y competitivo. -Estudio de digestibilidad in vivo de alimentos para camarón suplementados con fitasas. -Estudio sobre la eficacia en el proceso de desfinitización o disponibilidad de fósforo de harinas vegetales tratadas con la fitasa C recombinante y su comparación con dos fitasas comerciales. Impactos -Es factible técnicamente el escalar a nivel industrial el proceso de producción y purificación de la enzima fitasa C recombinante en Pichia pastoris. -La fitasa C es un producto alternativo y competitivo en cuanto a las propiedades con las enzimas comerciales, posee la ventaja de la termoestabilidad sobre otras enzimas probadas, sin embargo se tiene que demostrar que su producción industrial tiene ventajas económicas. Costos Estimados de la Aplicación de los Resultados y/o tecnología generada No se realizó ningún estudio de costos económicos. Ámbito de aplicación Pacífico Mexicano Información Adicional o Comentario -Una de los productos estimados en este trabajo era la posibilidad de registrar la patente del proceso de producción de la fitasa C recombinante, sin embargo a pesar de tener ventajas sobre algunas enzimas comerciales, es necesario aplicar el proceso para demostrar que tiene ventajas técnicas y económicas sobre las enzimas comerciales ya existentes. Así mismo en el 2006-2007 se ha generado a nivel internacional una gran cantidad de información de la fitasa C recombinante, encontrándose un proyecto chino que realizó la producción de esta misma enzima con un proceso similar al utilizado en esta investigación. -Por otra parte éste proyecto obtuvo el premio maltaClayton a la innovación en nutrición acuícola. Clave del proyecto: 2003-141 Sistema producto y/o línea estratégica de atención: Cadena Pesca Investigador: DRA. MARTHA GUERRERO OLAZARÁN Institución: Universidad Autónoma de Nuevo León Tel. y Fax: (81) 83294110 Ext.6439 correo-e: [email protected]